激光光散射檢測高速反流色譜
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光散射作為液相色譜法的一種選擇檢測原理已被提出。蒸發(fā)激光光散射檢測法(ELSD)作為一種通用檢測方法，是基于以下原理：洗脫液［例如來自一個(gè)高效液相色譜(HPLC)柱］被霧化和蒸發(fā)，從而在載氣流中留下溶質(zhì)的微小粒子。這些粒子通過一激光束，使光發(fā)生散射，散射的光被檢測。其響應(yīng)的大小與通過檢測器的溶質(zhì)質(zhì)量有關(guān)。已經(jīng)證實(shí)，使用HPLC分析碳水化合物和類脂時(shí)，ELSD會(huì)特別有用。
1 實(shí)驗(yàn)
溶媒HPLC級(jí)(Burdick&Jackson)。水通過Milli-Q系統(tǒng)(Millipore)凈化。參比物從C.RothInc.(Karlsruhe,F.R.G.)購買。“微量”高速反流色譜儀與一個(gè)30mL螺旋管和0.85mmI.D.聚四氟乙烯管從P.C.Inc.(Potomac,MD,U.S.A.)獲得；溶媒利用MiltonRoy實(shí)驗(yàn)室的泵泵?。籈LSD系統(tǒng)從Varex(Burtonsville,MD,U.S.A.)獲得；色譜圖被記錄在Varian9176型圖記錄儀上(滿標(biāo)1mV)。
首先用固定相充滿HSCCC螺旋管，然后開始旋轉(zhuǎn)，這時(shí)固定相被持續(xù)泵入。當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到1800r.min-1時(shí)，流動(dòng)相通過入口被引入。當(dāng)螺旋管達(dá)到平衡以后(即流出物由固定相改為流動(dòng)相時(shí))，將流速調(diào)為0.8mL.min-1。然后，將螺旋管出口與光散射檢測器相連接。當(dāng)基線變得平滑時(shí)指示溶媒已被完全蒸發(fā)。將化合物1～4(見圖1)溶解在固定相里。樣品溶液通過Valco公司的六通閥和0.25mL樣品環(huán)注入(圖1，0min)。注入的量為300μg(1)，10μg(2)，35μg(3)和20μg(4)。反壓低于1378.95kPa，運(yùn)行后固定相保留90%。檢測器預(yù)熱20min；時(shí)間恒量為1s。將檢測器的隨意流動(dòng)設(shè)為8，形成一個(gè)反壓為220.6kPa的氮載氣流。
2 結(jié)果和討論
HSCCC完成的標(biāo)準(zhǔn)化合物1～4的混合物的分離，這種分離由溶媒系統(tǒng)氯仿—甲醇—水(13∶7∶8)下層作為流動(dòng)相完成。流速為0.8mL.min-1。螺旋管流出物被直接引入ELSD系統(tǒng)的噴霧室內(nèi)。噴霧室和排氣管的溫度被分別設(shè)定為110℃和80℃。設(shè)定相對(duì)高的溫度是為了蒸發(fā)流動(dòng)相中的少量水份，并使非保留固定相(含水的)盡可能微滴化。含水固定相遺留下來不會(huì)影響色譜。對(duì)于2～4化合物(熔點(diǎn)超過200℃)每種化合物每次注射10～35μg時(shí)，可以得到很好的檢測響應(yīng)。而化合物1即使每次注射大于100μg，也僅可給出相對(duì)微弱的檢測信號(hào)。對(duì)此可能的解釋為：熔點(diǎn)為117℃的7-甲氧基香豆素(1)以液狀微滴通過檢測器光束，由此導(dǎo)致激光光線不能有效地散射。當(dāng)同一樣品混合物被分離時(shí)，其信噪比優(yōu)于光電二極管檢測器。
ELSD是一種靈敏而非專一性的質(zhì)量檢測方法，其檢測限大于毫微克數(shù)量級(jí)。然而，如果物質(zhì)的熔點(diǎn)等于或小于噴霧室溫度，則可能難以檢測。正如這里應(yīng)用的例子。這一點(diǎn)對(duì)于一個(gè)復(fù)雜的樣品，象分析植物提取物時(shí)則必須考慮。由于ELSD是一個(gè)非破壞技術(shù)，為了在制備型HSCCC使用這個(gè)檢測方法，可以在洗脫線上裝置一個(gè)流量分離管。由于固定相的殘留而引起檢測噪音，典型的象UV檢測器，則被完全消除了。我們的初步結(jié)果顯示，對(duì)分析型HSCCC來說，ELSD是一種理想的、易使用的檢測手段。進(jìn)一步對(duì)于無紫外線吸收化合物和高紫外切斷的溶媒的評(píng)價(jià)，目前正在我們實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行中。
評(píng)論