酶標(biāo)儀的檢測(cè)原理
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檢測(cè)單位：
光通過(guò)被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫(xiě)，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算：
E＝OD=C×D×E
C為檢測(cè)物的濃度
D為檢測(cè)物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波
長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，最大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0％，沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100％。則實(shí)際檢測(cè)中，檢測(cè)物的透光值均在 0％一100％之間。透光值
的計(jì)算如下：
T＝（Meas—Min）／（Max—Min）
其中T為透光值， Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Min為在 0％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Max為在100％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
T=（30-20）/3600-20)＝0．0028
OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量，選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來(lái)校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測(cè)定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來(lái)設(shè)置的，請(qǐng)按照試劑盒的 說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
檢測(cè)結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測(cè)試劑的體積，都會(huì)造成OD值的不同，因此， 只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
評(píng)論