中科院成功研制雙光子激發(fā)激光掃描實(shí)時(shí)立體顯微鏡
日前,中國科學(xué)院西安光學(xué)精密機(jī)械研究所瞬態(tài)光學(xué)與光子技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(簡稱:瞬態(tài)室)超分辨成像團(tuán)隊(duì)研制成功雙光子激發(fā)激光掃描實(shí)時(shí)立體顯微鏡,首次把基于雙目視覺的立體顯微方法和高分辨率雙光子激發(fā)激光掃描熒光顯微技術(shù)結(jié)合在一起,實(shí)現(xiàn)了對(duì)三維熒光樣品的高速立體成像,相關(guān)研究成果發(fā)表在2016年12月刊的PLOS ONE 雜志上,并被授權(quán)國家發(fā)明專利(專利號(hào)ZL201210384895.4)。
本文引用地址:http://www.ex-cimer.com/article/201702/344163.htm當(dāng)代生命科學(xué)研究對(duì)光學(xué)顯微技術(shù)提出了越來越高的要求——更高的空間分辨率、更大的成像深度、更快的成像速度。特別是對(duì)于生物活體顯微成像來說,生物組織對(duì)光的散射使得噪聲大大增強(qiáng),嚴(yán)重影響了空間分辨率和成像深度。為了提高成像深度,雙光子激發(fā)激光掃描熒光顯微技術(shù)自20世紀(jì)90年代提出后被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)成像等領(lǐng)域,但是其逐點(diǎn)掃描的成像方式嚴(yán)重制約了成像速度。因?yàn)楦叻直媛使鈱W(xué)顯微鏡的景深很小,要對(duì)樣品完成三維成像,通常需要數(shù)十層乃至上百層的二維圖像進(jìn)行疊加重建得到,圖像采集和處理一般需要數(shù)分鐘甚至數(shù)十分鐘,要快速實(shí)時(shí)地獲取和顯示三維圖像非常困難。
瞬態(tài)室超分辨成像團(tuán)隊(duì)在研究員姚保利和葉彤的帶領(lǐng)下,以雙目視覺原理和貝塞爾光束產(chǎn)生擴(kuò)展焦場為基礎(chǔ),提出了由四個(gè)振鏡組成的激光束立體掃描裝置,實(shí)現(xiàn)了對(duì)貝塞爾光束的橫向位置和傾角共三個(gè)維度的控制,突破了只有兩個(gè)自由度的傳統(tǒng)激光掃描不能實(shí)時(shí)切換視角的限制。通過對(duì)四振鏡立體掃描裝置的優(yōu)化設(shè)計(jì)和控制,實(shí)現(xiàn)了對(duì)貝塞爾光束的三自由度快速掃描,可在毫秒量級(jí)進(jìn)行雙視角切換,從而解決了激光掃描立體顯微成像系統(tǒng)中雙光路同時(shí)成像的技術(shù)難題,首次實(shí)現(xiàn)了基于雙視角實(shí)時(shí)激光掃描的立體顯微成像和顯示系統(tǒng)。該系統(tǒng)可對(duì)樣品進(jìn)行立體動(dòng)態(tài)成像和實(shí)時(shí)雙目立體觀測(cè),其三維成像速度比傳統(tǒng)的逐點(diǎn)掃描方式提高了一到兩個(gè)數(shù)量級(jí)。該雙光子立體顯微系統(tǒng)為活體生物的三維實(shí)時(shí)成像和顯示提供了一種新的觀測(cè)工具。
“它可以讓我們像觀看立體電影一樣實(shí)時(shí)地觀測(cè)動(dòng)態(tài)的三維微觀世界,無需光切片,無需耗時(shí)的三維圖像重構(gòu)。”楊延龍如此總結(jié)這套系統(tǒng)的特點(diǎn),他負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)和完成了其中的立體掃描和成像顯示的關(guān)鍵部分。“雙目視覺成像是非常高效的三維信息獲取方式,但是現(xiàn)有的體視顯微鏡,空間分辨率和景深互相制約,我們利用三自由度掃描的貝塞爾光束進(jìn)行非線性熒光激發(fā)突破了這種限制。”
這項(xiàng)研究先后在中科院“百人計(jì)劃”和國家自然科學(xué)基金的支持下,從基本原理驗(yàn)證、關(guān)鍵技術(shù)突破,到原理樣機(jī)完成,經(jīng)歷了從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用集成的各個(gè)環(huán)節(jié)。目前,課題組正在與國內(nèi)外相關(guān)科研機(jī)構(gòu)開展生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用的合作研究,期望盡快將該項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于生物活體三維快速成像和顯示領(lǐng)域。
花粉和熒光小球樣品的紅藍(lán)立體圖像(可佩戴紅藍(lán)眼鏡觀看)
評(píng)論