利用RRLC改善西洋參HPLC的分離速度和靈敏度

圖4 西洋參分析中RRLC梯度分離的重現(xiàn)性，色譜條件同圖3RRLC和HPLC的轉(zhuǎn)換

RRLC的良好兼容型與靈活性，使用戶可以根據(jù)需要在同一儀器硬件上靈活使用常規(guī)HPLC色譜柱和RRLC色譜柱。而鍵合相品牌豐富的ZORBAX RRHT色譜柱（如SB、XDB、Extend、Eclipse Plus等），又為相同品牌、不同粒徑填料之間方法的相互轉(zhuǎn)換提供了便利條件，使RRLC與HPLC之間方法的相互轉(zhuǎn)換非常方便?；诂F(xiàn)有RRLC分離條件，也可以非常容易地獲得相應(yīng)HPLC的分離方法。只需用Method Translator將參數(shù)進(jìn)行直接轉(zhuǎn)換，即可獲得根據(jù)RRLC方法優(yōu)化參數(shù)相應(yīng)的HPLC條件參數(shù)。本研究使用相同的RRLC系統(tǒng)和HPLC色譜柱，獲得了分離選擇性與RRLC幾乎完全相同的HPLC分離結(jié)果（見圖5）。

圖5 西洋參分析中HPLC與RRLC分離色譜圖比較值得注意的是：與RRLC相比，HPLC在相同進(jìn)樣量時獲得的色譜峰高較低，故相對靈敏度較低。同時，分離時間也大大加長，溶劑消耗亦相應(yīng)提高。

討論與結(jié)論

－中國藥典的藥物分析方法中并未指定色譜柱品牌。而不同品牌、相同鍵合相的色譜柱又存在不同的選擇性差異，故直接應(yīng)用藥典方法時往往需要對方法進(jìn)行調(diào)整或優(yōu)化，尤其是對于復(fù)雜樣品的分離而言。使用小顆粒短柱的RRLC分離可以顯著加快分離速度，故可以大大縮短方法開發(fā)和優(yōu)化過程所需的時間。如此獲得的RRLC分離條件，又可以簡單方便地轉(zhuǎn)換成常規(guī)HPLC方法，并在RRLC系統(tǒng)上實現(xiàn)HPLC分離。所以，使用RRLC系統(tǒng)進(jìn)行分離會大大提高工作效率。

－RRLC分離不僅可以大幅度縮短分析時間，而且能夠降低溶劑消耗。

－RRHT色譜柱擁有與常規(guī)HPLC內(nèi)徑相同的4.6mm色譜柱，使之可以接近或保持與HPLC相同的進(jìn)樣量。與HPLC相比，在保持相同進(jìn)樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離靈敏度。

－RRLC可以在快速分析中仍然保持出色的分離重現(xiàn)性。

－不同色譜柱具有不同的選擇性，因而可以造成方法轉(zhuǎn)換中的分離狀況變化。選擇具有相同鍵合相品牌的不同顆粒色譜柱，會簡化HPLC與RRLC方法之間相互轉(zhuǎn)換中的參數(shù)優(yōu)化過程。ZORBAX系列RRHT色譜柱涵蓋了非常豐富的鍵合相品牌，如SB、XDB、Eclipse Plus、Extend等，方便用戶靈活選擇與HPLC相同品牌鍵合相的小顆粒填料。

－溫度對色譜柱選擇性的調(diào)節(jié)作用不可小視。RRLC具有制冷功能的柱溫箱，不僅溫度控制范圍寬（室溫以下15～100℃），而且控溫精確高（±0.05℃），即便在室溫以下亦能精密控溫?？焖佟⒕_的溫度調(diào)節(jié)與控制能力，不僅保證了分離的保留時間重現(xiàn)性，而且為用戶利用溫度進(jìn)行選擇性調(diào)節(jié)提供了極大的便利。

色譜條件
色譜柱：ZORBAX SB C18 4.6×150mm，5
流動相：A為0.1%H3PO4，B為乙腈，梯度分離
流速：1ml/min
其它條件同圖2。(end)