一種簡單快速的miRNA檢測新方法

　　PCR和Northernblot是目前檢測單個miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高，但假陽性的憂慮和引物設(shè)計的困難限制了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測工具，但傳統(tǒng)的固相雜交技術(shù)程序復(fù)雜、時間漫長且操作不便。新出現(xiàn)的液相雜交技術(shù)檢測速度快，但需要特定的熒光信號檢測儀器。

　　方法改進(jìn)：我們這里報道一種新的miRNA檢測方法：液相雜交顯色法（LHCD）。

　　這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行液相雜交，接著用核酸外切酶消化多余的探針，再將雜交液點于尼龍膜上，之后ABC孵育，最后BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。

　　LHCD能夠區(qū)別miRNA家族成員間一個堿基的差異，其靈敏度可以達(dá)到2.5fmol，全過程耗時不到3個小時。本方法由于整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號放大系統(tǒng)（ABC）兩大技術(shù)，不但實現(xiàn)了miRNA的簡單、快速、高靈敏度檢測，其可視化的信號目測，還省去了昂貴的信號檢測儀。此外，本方法簡單的操作流程，使其容易學(xué)習(xí)和方便使用。