理想的三聚氰胺檢測(cè)方法
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一些奶農(nóng)將牛奶稀釋以增加利潤，尤其是在技術(shù)發(fā)展緩慢、牛奶生產(chǎn)的利潤率并未隨效率的提高而增加的地方。這種稀釋行為使得牛奶質(zhì)量下降，蛋白質(zhì)、脂肪以及糖的濃度顯著降低。一些奶農(nóng)稀釋牛奶的程度高達(dá)30%，隨后使用三聚氰胺掩飾這種欺詐行為。質(zhì)量控制設(shè)備檢測(cè)的是正常水平的氮元素（蛋白質(zhì)含有的），三聚氰胺中高含量的氮能夠在檢測(cè)中蒙混過關(guān)，讓造假的牛奶作為優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品通過檢測(cè)，從而顯著地增加利潤。
三聚氰胺與三聚氰酸結(jié)合后（通常見于三聚氰胺廢渣中的一種雜質(zhì)）在體內(nèi)聚集，形成不溶晶體，產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性。氰尿酸三聚氰胺吸收進(jìn)入血液，在腎臟微管的尿液中聚集并發(fā)生作用。隨后結(jié)晶，形成大量球形黃色晶體，堵塞并損傷微管中的腎臟細(xì)胞，導(dǎo)致嚴(yán)重的腎功能障礙。接觸時(shí)間延長則會(huì)導(dǎo)致其他健康問題，例如生殖損傷、膀胱或腎結(jié)石、以及癌癥。食品中蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法是凱氏定氮法以及杜馬斯燃燒法，兩種方法測(cè)定的都是氮的含量。這些方法不能將三聚氰胺的氮與氨基酸中天然存在的氮元素區(qū)分開來。已經(jīng)有高靈敏度的方法用于檢測(cè)三聚氰胺，而不是測(cè)定氮元素。液相色譜（LC）可以單獨(dú)使用，或是與串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合使用（LC/MS/MS），還可以將氣相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合使用（GC/MS/MS）。
這些色譜方法非常精確，但對(duì)于設(shè)備和操作而言，準(zhǔn)備及運(yùn)行的成本都非常高。因此迫切需要一個(gè)簡(jiǎn)單的高通量篩選方法，以合理的成本精確檢測(cè)牛奶中三聚氰胺的殘留量。
經(jīng)典的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）測(cè)量可以作為一個(gè)理想的解決方案。這種方法可以在微孔板中進(jìn)行，因此樣品數(shù)量較多時(shí)可以同時(shí)進(jìn)行，儀器成本也不高。已經(jīng)開發(fā)了免疫測(cè)定試劑盒，可以高效、簡(jiǎn)便、靈敏地檢測(cè)乳制品、動(dòng)物飼料以及寵物食品的原料中的三聚氰胺污染物。
本文是關(guān)于如何使用簡(jiǎn)便的ELISAs ，高靈敏地篩選牛奶樣品中的三聚氰胺。這些檢測(cè)需要具備足夠的靈敏度，檢出10礸以下的三聚氰胺，這是全世界的監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)非嬰兒類食品設(shè)定的界限。
經(jīng)典的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）測(cè)量可以作為
一個(gè)理想的解決方案來測(cè)定三聚氰胺含量。
本研究中，使用了兩種來自不同生產(chǎn)商、但是基本原理相同的三聚氰胺ELISA商品試劑盒。未知樣品以及辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的三聚氰胺均置于三聚氰胺抗體包被的微孔板孔中。HRP標(biāo)記的三聚氰胺與未知樣品中的三聚氰胺競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體。結(jié)合率相當(dāng)于HRP標(biāo)記物與游離三聚氰胺的濃度比。因此，與抗體結(jié)合的HRP標(biāo)記物的量與樣品中游離三聚氰胺的數(shù)量反向相關(guān)。
結(jié)合階段之后，使用微孔板清洗機(jī)去除未結(jié)合的物質(zhì)，加入HRP顯色底物。測(cè)定的HRP酶活與HRP標(biāo)記的三聚氰胺的數(shù)量成正比，并且與未知樣品中三聚氰胺的濃度有關(guān)。規(guī)定的孵育時(shí)間之后中止反應(yīng)，測(cè)定形成的有色染料的量。如果樣品中不存在三聚氰胺，通過形成的有色染料的數(shù)量及較高吸收值可以得知酶活水平較高。未標(biāo)記的游離三聚氰胺的量增加，則活力水平和吸收值降低。因此根據(jù)校準(zhǔn)曲線（隨后討論）就可以直接測(cè)定三聚氰胺的濃度。
評(píng)論