一招變身檢測熒光達人

　　讓我們再來看一個激發(fā)塊的光譜圖：

上圖為olympus U-FGW激發(fā)塊的光譜信息，可以看出此激發(fā)塊可以提供的激發(fā)光在530-560nm左右，允許透過的熒光光譜范圍在570nm以上，所以此激發(fā)塊并不適合DAPI激發(fā)。如果用此激發(fā)塊來做DAPI的觀察，就會出現(xiàn)看不到熒光的現(xiàn)象。

　　可見，要選擇合適的熒光激發(fā)塊，我們首先要知道熒光染料激發(fā)和發(fā)射光的波長特性和激發(fā)塊光譜的各項數(shù)據(jù)。但是，熒光染料和濾色片的種類非常多，用戶往往沒有渠道來獲取這些信息。在實際實驗中使用熒光顯微鏡時，因為熒光激發(fā)塊配置錯誤而得不到好的觀察效果的現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，對于用戶來說是一件非常煩惱的事。

　　為了方便用戶正確選擇激發(fā)和發(fā)射波長，節(jié)省時間，日本理化研究所腦科學所－奧林巴斯合作中心（the RIKEN BSI-Olympus Collaboration Center ： http://rikenbocc.brain.riken.jp/index_e.html）開發(fā)了軟件Spectrum Manager。用戶選擇熒光染料，軟件會給出染料的光譜信息和推薦的濾色片選擇等信息，使用非常方便。

　　還可利用Data Manager自行對光源信息、染料數(shù)據(jù)庫或濾色片信息進行更新。

　　此款軟件已經(jīng)整合至奧林巴斯共聚焦顯微鏡的一款軟件中，發(fā)布以來得到了用戶非常好的反響。因此，現(xiàn)將該軟件開放給所有顯微鏡使用者，供大家免費使用。

　　下載地址：http://cn.olympus.com/smkx_second/second.aspx？nodeid=187page=ContentPagecontentid=1011

　　由于是針對共聚焦顯微鏡的軟件，所以軟件中僅提供了激光光源譜線。如果您有需要，也可以將汞燈和氙燈光源信息導入至軟件。

　　以下提供普通熒光顯微鏡常用的汞燈和氙燈光源的圖譜，供大家參考。

　　汞燈在313， 334， 365， 406， 435， 546， and 578nm有比較好的激發(fā)峰。

　　氙燈在可見光光譜范圍內(nèi)強度更穩(wěn)定（沒有像汞燈那樣的光譜峰值），在紅外波段比汞燈強度高。但在紫外波段有一定的缺陷性。

　　所以選擇光源時，光源特性要與我們的具體應用相匹配。